Каково южное Пятно?
Южное пятно - методика, которая используется, чтобы обнаружить ДНК в образце, и определить, сколько ДНК присутствует. Эта процедура названа по имени Эдвина Саузерна, британского биолога, который вел методику в 1970 с. Саузерн-блот-анализ использует электрофорез в геле, чтобы отделить фрагменты ДНК в образце и затем использует исследования, чтобы обнаружить последовательности ДНК интереса.
Саузерн-блоттинг начинается с образца ДНК, которая была извлечена из клеток. ДНК обрабатывают с ферментами ограничения, которые расщепляют нуклеиновую кислоту во фрагменты изменения размеров. Затем, ДНК управляют через электрофорез агарозного геля денатурирования. Этот процесс разделяет фрагменты на одиночные нити в то же самое время, поскольку они также отделены размером.
следующий шаг в южном пятне должен передать отделенные фрагменты ДНК листу нейлона или нитроцеллюлозы, которая считает фрагменты неподвижными. После этого лист культивирован с исследованием гибридизации одноцепочечной ДНК. Последовательность исследования разработана так, чтобы это затвердело к последовательности ДНК, которую эксперимент пытается обнаружить. Каждый фрагмент исследования затвердеет к его дополнительной последовательности ДНК, если он будет существовать в образце, чтобы формировать раздел двухспиральной ДНК. Исследование маркировано радиоактивным изотопом, или ферментом. Многократные исследования могут использоваться в том же самом эксперименте.
Когда инкубация полна, заключительный шаг в южном процессе пятна должен показать местоположения, где исследование затвердело к дополнительной ДНК. Если исследование было маркировано радиоактивным изотопом, это сделано при использовании рентгеновского излучения, чтобы обнаружить пятна, где исследование скрестилось к типовым фрагментам ДНК. Когда фермент используется, дальнейшая инкубация выполнена. Фермент, используемый с этой целью, является тем, который производит цветное изделие, когда это реагирует со своим субстратом, таким образом, южное пятно закончено, добавляя субстрат, чтобы показать местоположения, где ДНК исследования затвердела к типовой ДНК.
Южные пятна полезны для множества причин. Самое простое использование методики должно использовать исследование, чтобы идентифицировать последовательности ДНК, которые представляют интерес, или которые должны быть изолированы для другого использования. Саузерн-блоттинг также используется, чтобы определить, сколько копий специфической последовательности присутствует в образце. Это возможно, потому что более сильный радиоактивный или ферментативный сигнал произведен, когда больше копий последовательности присутствует и связано к исследованиям.
Другое обычное использование методики находится в генетической манипуляции бактерий и других микроорганизмов. В этом случае бактериальная ДНК исследована, чтобы определить, была ли иностранная ДНК успешно введена в бактерии. Саузерн-блоттинг - также основание для методики полиморфизма длины фрагмента рестрикции.